GFP熒光蛋白激發(fā)光源應用案例
熒光蛋白激發(fā)光源應用于植物和動物研究實驗室，為廣大動植物研究的科研工作者帶來了諸多的便利，以下為熒光蛋白激發(fā)光源常見應用：
1、有時候，研究者們需要對小鼠的伏隔核進行穿孔，以便進一步生化分析。如果能觀測到共轉染的熒光，就能很容易找到正確的穿孔部位。研究者們就可以用LUYOR-3260RB單熒光蛋白觀測手電筒來觀測熒光，從而找到正確穿孔位置的。研究者從小鼠大腦中提取GFP標記的背紋體。他們把這比喻成：從一個大一點的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片，這是很困難的。但是他們用的單熒光蛋白觀測手電筒LUYOR-3430RB，就很容易看到大腦中的目標區(qū)域，從而讓解剖更準確。
2、用LUYOR-3430RB單熒光蛋白觀測手電筒，可以很快的檢測樣本是否染色（Alexa Fluor 488 Phalloidin標記）成功。
3、用于結核分枝桿菌重組株的篩選，在結核分枝桿菌中成功構建了高效同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個突變株,得到雙交換突變株的效率為25％ -62.5％,從雙交換突變株得到無痕缺失突變株的效率為100％.通過gfp作為熒光標記基因,利用LUYOR-3430RB GFP激發(fā)光源和LUV-30A熒光觀測眼鏡,可以對平板上的基因缺失株直接進行快速判定。
熒光蛋白激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時，用LUV-30A黃色濾光鏡觀測，可檢測含綠色熒光蛋白（GFP）的生物；激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時，用LUV-50A紅色濾光鏡觀測，可檢測含紅色熒光蛋白（DsRed）的生物。更多熒光蛋白激發(fā)光源用于檢測、篩選轉綠色熒光蛋白（GFP）和紅色熒光蛋白（DsRed）基因的植物、動物及微生物，如水稻、玉米、斑馬魚、小鼠、細：菌、真菌等等，請咨詢上海峰志儀器有限公司。
RFP熒光蛋白在老鼠上的表達
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GFP激發(fā)光源在細胞生物學的應用
GFP激發(fā)光源在細胞生物學的應用具有易于檢測、熒光穩(wěn)定、廣譜性、易于載體構建、無毒害諸多優(yōu)點，因為在生物學應用廣泛，上海峰志儀器有限公司銷售的GFP激發(fā)光源為你簡單整理10個應用：
1、對細胞生理過程監(jiān)控
通過基因操作，蛋白與不同GFP進行融合，形成融合蛋白。通過融合蛋白在激發(fā)光源的照射下發(fā)出熒光特制，可以對相應蛋白的表達和轉運以及生理反應進行監(jiān)控。監(jiān)控主要有：轉移和定位、GFP光譜的生化修飾、熒光共振的能量轉移。
2、細胞篩選
基于GFP能夠吸收并在激發(fā)光源照射下發(fā)出熒光，并且熒光穩(wěn)定以及檢測方法快速、方便的特性，GFP在細胞篩選上廣泛應用。如：應用流失細胞計數儀來篩選蛋白產量增強的細胞；使用GFP作為標記快速篩選出在生長抑制環(huán)境下仍能保持重組蛋白大量表達的CHO細胞；通過GFP熒光的減少，可以檢測出鼠和人細胞的凋亡；利用GFP融合細胞作為細胞表面活體熒光標記，通過篩選已經獲得GFP表達的E.coli、人體腎細胞和猿猴COS-1細胞燈特殊類型。
3、細胞亞結構及蛋白質分子的定位
相對于以前使用細胞分級分離和免疫細胞化學技術研究蛋白質移位，現在使用GFP融合蛋白顯像技術更簡便且可靠，既能更快又能更全面的對蛋白質的移動進行研究。如：對幾個GFP突變體的檢定，通過激發(fā)光源激發(fā)不同熒光，從而在活細胞中準備的區(qū)分多種不同熒光融合蛋白并了解他們的分布情況。
4、用于細胞內蛋白質的動力學研究
研究細胞內蛋白質相互作用的技術主要有：光漂白熒光恢復法（FRAP）、光漂白熒光損失法(FLIP)。FRAP主要是通過對細胞內特定的點或區(qū)域進行強烈的光照，使熒光發(fā)生光跑白作用，再通過相同時間間隔的光影像采樣記錄下熒光恢復的動力學過程。FLIP是對細胞的一個區(qū)域進行持續(xù)性的光漂白，再對光漂白區(qū)外的熒光的損失進行監(jiān)控就可獲得一些標記蛋白之間的相關性信息。另外一種可以用來研究細胞內返傭動力學的方法就是熒光相關性分光光鏡檢查。
5、計算細胞生長速度
在高水平組合型表達GFP的細胞品系中，在細胞生長的對數期。綠色熒光蛋白激發(fā)后所發(fā)出的熒光信號與細胞的數量密切相關。測量到的任何熒光強度都可以相應地轉變?yōu)榧毎麧舛?。盡管在細胞生長的后期，用熒光信號計算得到的細胞數目略低于培養(yǎng)物種的實際數目。但在常用的臺盼藍技術方法中，這些誤差是允許的。利用這一技術，可以測定某些細胞的分布和生長狀況，尤其是一些透明的動植物組織內特定細胞、化合物的生長、分布情況。也有人用此項技術進行病毒在植物體內的生長、擴散情況的研究，取得了不錯的效果。
6、觀察細胞內酶的活動
GFP不僅可以用來探測融合蛋白的空間定位，而且可以對活細胞的酶活動，如：磷酸化作用、蛋白水解作用燈進行報告，還可測量與酶活動相關的細胞內的pH、cAMP、Ca2+濃度。通過將外源系列插曲GFP基因中，可以對細胞內酶的活動進行觀察以及了解這些酶的生理學參數。插入外源基因后所表達的融合蛋白中的GFP蛋白發(fā)色基團會發(fā)生構像改變，其發(fā)射的熒光的強度發(fā)生很大的變化。這些指示劑可以用來檢測細胞內許多酶的作用。例如：蛋白水解酶、激酶、氧化還原酶以及一些小配基的濃度。
7、用于細胞示蹤實驗研究
利用GFP的激發(fā)后發(fā)出熒光可以清楚地對腫瘤細胞的生長和轉移進行追蹤。體內腫瘤侵襲的研究要求在周圍正常細胞背景下，能識別少量甚至是單個的瘤細胞。
8、基因表達調控
GFP作為一種活體報告蛋白，用于研究基因表達的調控，易于會提觀測和檢測。
9、定量分析
GFP的熒光強度很高，很容易用一起定量檢測，而且研究表明GFP的熒光強度與其相連的細胞或蛋白有一定的相關性，只需要作出一條相關性曲線，就可以對研究隊形進行定量的分析。
10、DFP報告蛋白用于細胞活體分離與純化
利用細胞表面標記，通過流體細胞分光光度計或熒光活化細胞篩選儀可以分離與純化特殊類型細胞，對分析cDNA文庫、研究基因的細胞發(fā)育或組織專一性表達十分重要。利用GFP融合蛋白為細胞表面活體熒光標記，通過篩選已經獲得GFP的表達的大腸桿菌、人體腎細胞和猿猴COS-1細胞特殊類型。
上海峰志儀器有限公司現貨供應各種熒光蛋白激發(fā)光源（GFP、eGFP、BFP、CFP、YFP、RFP、Dsred、Mcherry），能夠觀測綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、紅色熒光蛋白等在種子、愈傷組織、葉片等上的表達，便攜式GFP激發(fā)光源能夠在實驗室、溫室大棚、試驗田等地方直接觀測熒光蛋白的表達，請根據網頁底部聯系方式聯系：138-1868-3556，聯系人：張小姐。
熒光蛋白GFP的應用
熒光蛋白GFP在激發(fā)光源的照射下，人眼能明顯的看到熒光，而一起被廣泛應用于各種生物研究，主要特性如下
1、易于檢測
GFP熒光反應不需外加任何反應底物，酶或其他共反應銀子，也就不存在這些物質可能難于進入細胞的問題，只需紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)，即可發(fā)出綠色熒光，GFP發(fā)射的熒光用LUV-30A熒光觀測眼鏡或用熒光顯微鏡就可以檢測到。靈敏度高，對于單細胞水平的表達也可識別，同時還可利用其進行定量檢測。由于GFP對活細胞基本無毒害，因此無需特殊處理就可以很方便進行活體觀察。而且，具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得，使在同一細胞中同時分析兩種不同蛋白或啟動子成為可能，可以用于法語細胞學、藥物篩選、分析診斷燈研究。這就使GFP有可能成為一種快速、簡便、經濟的標記蛋白，GFP基因作為報道基因有很廣泛的應用。
2、熒光穩(wěn)定
GFP無光漂白現象，在很大PH范圍內（PH7-12）都可以正常發(fā)出熒光，手溫度的影響也很小，只有在超過65℃時才會變性，即熒光消失。熒光顯微鏡強光照射下，GFP抗光漂白能力比熒光素強，特別是在450~490nm藍光波長下更穩(wěn)定，單在340-390nm或395-440nm范圍內，仍會發(fā)生光漂白現象。對于長時間光照，GFP也有很好的耐受性，根據Sheen等的研究，GFP在受體內表達時可以持續(xù)得到不低于10min的熒光。
3、廣譜性
首先表現在它的表達幾乎不受種屬范圍的限制，在微生物、植物、動物中都獲得了成功的表達；其次就是沒有細胞種類和位置的限制，在各個部位都可以表達，在紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)下發(fā)出肉眼可見的熒光。
4、易于載體構建
由于GFP較小，只含有238個氨基酸，編碼GFP的基因序列也比較短，約2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起構建多種質粒，而不至于使質粒過大影響轉化頻率。盡管野生型的GFP在某些植物和動物中表達很弱，但是可以通過更換GFP生色團氨基酸改變堿基組分、出去內含子、更換強啟動子燈方法加強表達。Connack等篩選出三種含Ser65突變的突變體，在大腸桿菌中表達時，紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)下的熒光強度比野生型高約100倍。
5、無毒害
Chalfie等的研究表明：GFP對生活細胞基本無毒害，Sheen等的研究進一步表明：在玉米中，即便GFP在細胞中的表達量很高時，對細胞也不會產生明顯毒害，但是至今我們還不了解它對植物再生能力的影響。
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