?GFP手電筒用于轉(zhuǎn)基因研究的熒光標記

GFP手電筒用于哺乳動物轉(zhuǎn)基因研究的熒光標記

為了確定熒光蛋白在眼睛中的可見性，我們使用了手持便攜式雙熒光手電筒下檢查了轉(zhuǎn)基因小鼠。32 行中有 27 行（84%）在便攜式GFP手電筒下激發(fā)后顯示出可見熒光（圖 2A）。這些眼睛標記在便攜式長波紫外線燈LUYOR-3280UV下也可見，如前所述，使用無處不在的熒光標記。不同線條之間的熒光強度不同，只有在暗室中激發(fā)后才能看到zui暗的線條，即使沒有激發(fā)，在室內(nèi)光線下也能看到zui亮的線條（圖 2B）。我們還在黑色和刺鼠背景上劃了一些線，以分析色素如何影響熒光眼標記的可視化。色素的存在降低了熒光強度（圖 2B）。盡管如此，即使房間燈打開，在刺鼠和黑色背景中仍然很容易看到高和中 EGFP 和 tdTomato 線。然而，低表達的報告線在有色小鼠中是微弱的，盡管它們在黑暗的房間中仍然可以檢測到。因此，這些記者可用于色素和非色素小鼠。重要的是，我們已經(jīng)將這些品系維持了許多代（某些品系中 > 25 代），并且我們沒有觀察到熒光標記隨著時間的推移而失活。因此，可以從一代到下一代始終如一地跟蹤眼睛標記熒光。

GFP手電筒和RFP手電筒照射效果對比：

鏡頭中表達的各種熒光蛋白可以在手持轉(zhuǎn)基因熒光手電筒照射下可直接觀察。使用GFP手電筒可以看到五個熒光眼標記，而使用RFP手電筒只能看到 mOrange、tdTomato 和 mPlum。(B) EGFP 和 tdTomato 標記表達在轉(zhuǎn)基因系 (低、中、高) 之間變化。插圖顯示 EGFP “高”線在無激發(fā)的室內(nèi)光下可見。EGFP“中”和 tdTomato“高”轉(zhuǎn)基因系也顯示在有色（Agouti，黑色）背景中。請注意，熒光眼標記的可見性在有色背景中會降低。

GFP手電筒：

GFP手電筒又叫熒光蛋白觀察手電筒，英文名：GFP flashlight，GFP torch，GFP手電筒是通過發(fā)出藍光或紫外光激發(fā)動植物體內(nèi)發(fā)熒光蛋白發(fā)光，通過專用的熒光蛋白觀察眼鏡，操作者就能夠直接觀察到綠色熒光蛋白的表達效果，是近幾年才上市的一款便攜式激發(fā)光源，是做轉(zhuǎn)基因研究不需要熒光顯微鏡就能觀察熒光的方便快捷的工具。

上圖：LUYOR-3280 GFP手電筒

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